色譜定量分析，顧名思義就是色譜分析方法來測定組分的含量，主要分為面積百分比法、歸一化法、外標法、內(nèi)標法和標準加入法，色譜定量分析首先需要明確的概念是響應(yīng)因子，不同的化合物在檢測器的響應(yīng)是不一樣的，簡單地舉個例子說，相同濃度的化合物A和B，相同的進樣量，得到的峰高和峰面積不一定一樣的，響應(yīng)因子的計算式如下：

式中，w為化合物的含量，A為響應(yīng)值，一般為峰面積或峰高，以峰面積為例。由于不同的化合物在同一個檢測器的響應(yīng)因子不同，甚至同一個化合物不同濃度在同一檢測器的響應(yīng)因子不同，簡單地說就是化合物在檢測器的響應(yīng)不呈線性，或者線性范圍比較窄。選擇合適的定量方法時，除需要考慮是相對定量還是絕對定量外，同時需要考察化合物的線性響應(yīng)范圍、是否有合適內(nèi)標、是否有標準品等。接下來就主要介紹下色譜分析中常用的幾種定量方法。

1.歸一化法

由于組分的量與其峰面積成正比，如果樣品中所有組分都能產(chǎn)生信號，得到相應(yīng)的色譜峰，那么可以用如下歸一化公式計算各組分的含量。

若樣品中各組分的校正因子相近，可將校正因子消去，直接用峰面積歸一化進行計算。中國藥典用不加校正因子的面積歸一化法測定藥物中各雜質(zhì)及雜質(zhì)的總量限度。

優(yōu)點：簡便、準確、定量結(jié)果與進樣量重復(fù)性無關(guān)(在色譜柱不超載的范圍內(nèi))、操作條件略有變化時對結(jié)果影響較小。

缺點：必須所有組分在一個分析周期內(nèi)都流出色譜柱，而且檢測器對它們都產(chǎn)生信號。不適于微量雜質(zhì)的含量測定。

2、外標法 

用待測組分的純品作對照物質(zhì)，以對照物質(zhì)和樣品中待測組分的響應(yīng)信號相比較進行定量的方法稱為外標法。此法可分為工作曲線法及外標一點法等。

工作曲線法是用對照物質(zhì)配制一系列濃度的對照品溶液確定工作曲線，求出斜率、截距。在完全相同的條件下，準確進樣與對照品溶液相同體積的樣品溶液，根據(jù)待測組分的信號，從標準曲線上查出其濃度，或用回歸方程計算，工作曲線法也可以用外標二點法代替。通常截距應(yīng)為零，若不等于零說明存在系統(tǒng)誤差。工作曲線的截距為零時，可用外標一點法(直接比較法)定量。

外標一點法是用一種濃度的對照品溶液對比測定樣品溶液中i組分的含量。將對照品溶液與樣品溶液在相同條件下多次進樣，測得峰面積的平均值，用下式計算樣品中i組分的量：

Wi=AiWs/As

式中Wi與Ai分別代表在樣品溶液進樣體積中所含i組分的重量及相應(yīng)的峰面積。Ws及As分別代表在對照品溶液進樣體積中含純品i組分的重量及相應(yīng)峰面積。

優(yōu)點：簡便，不需用校正因子，不論樣品中其他組分是否出峰，均可對待測組分定量。

缺點：此法的準確性受進樣重復(fù)性和實驗條件穩(wěn)定性的影響。

此外，為了降低外標一點法的實驗誤差，應(yīng)盡量使配制的對照品溶液的濃度與樣品中組分的濃度相近。

3、內(nèi)標法

選擇樣品中不含有的純物質(zhì)作為對照物質(zhì)加入待測樣品溶液中，以待測組分和對照物質(zhì)的響應(yīng)信號對比，測定待測組分含量的方法稱為內(nèi)標法。“內(nèi)標”的由來是因為標準(對照)物質(zhì)加入到樣品中，有別于外標法。該對照物質(zhì)稱為內(nèi)標物。

在一個分析周期內(nèi)不是所有組分都能流出色譜柱(如有難氣化組分)，或檢測器不能對每個組分都產(chǎn)生信號，或只需測定混合物中某幾個組分的含量時，可采用內(nèi)標法。

準確稱量W克樣品，再準確稱量Ws克內(nèi)標物，加入至樣品中，混勻，進樣。測量待測組